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Jean-Paul Rouve grandit à Dunkerque, il travaille à Radio Corsaire comme pousse disque dès l'âge de {{nombre}}{{refnec}} et s'initie au théâtre durant sa scolarité. Il suit des cours au centre dramatique national du Nord-Pas de Calais et fonde une troupe de théâtre amateur. Rouve part à Lille afin d'étudier les sciences de l'information et de la communication. En 1989, grâce à l'une de ses amies, Emmanuelle Lepoutre, il assiste à un cours donné par Isabelle Nanty dans une école de théâtre, le cours Florent, et décide de rester à Paris afin d'étudier la comédie. Il vit en effectuant de petits boulots{{,}}.
En tournée dans le Nord avec une troupe de théâtre, il est remarqué par le réalisateur belge Pierre Joassin, ce qui lui permet d'apparaître dans un téléfilm. Il décroche ensuite un rôle dans le feuilleton télévisé Julie Lescaut{{,}}.
Rouve fonde la troupe des Robins des Bois avec Marina Foïs, Maurice Barthélémy et Pierre-François Martin-Laval, jeunes acteurs rencontrés au cours Florent, bientôt rejoints par Élise Larnicol et Pascal Vincent. En 1997, la troupe joue Robin des Bois d'à peu près Alexandre Dumas dans une grange à Fontainebleau. L'intervention de Dominique Farrugia, qui assiste à leur spectacle, leur permet de monter la pièce au Théâtre de la Gaîté-Montparnasse, puis au Splendid. Elle totalise {{nombre}}. La troupe participe ensuite à La Grosse Émission sur la chaîne Comédie !, créée à l'initiative de Farrugia.
En 1998, Rouve se produit dans un registre différent dans Karnaval, film d'auteur réalisé par Thomas Vincent. Au cinéma, il tient des seconds rôles. Il interprète notamment l'avocat dans Tanguy d'Étienne Chatiliez et le collabo Pierre-Jean Lamour dans Monsieur Batignole, rôle pour lequel il obtient le César du meilleur espoir masculin en 2003.
Le succès de ces interprétations l'entraîne vers des rôles plus importants comme dans Un petit jeu sans conséquence (où il retrouve Marina Foïs, sa comparse des Robins des Bois), Podium avec Benoît Poelvoorde, Bunker Paradise de Stefan Liberski. Il tourne dans deux films réalisés par Éric Toledano et Olivier Nakache, Je préfère qu'on reste amis..., où il partage l'affiche avec Gérard Depardieu, et Nos jours heureux, comédie à succès de l'été 2006.
Il interprète ensuite Louis Gassion, le père d'Édith Piaf, dans un film biographique retraçant sa vie : La Môme réalisé par Olivier Dahan. Il apparaît également dans Ce soir je dors chez toi d'Olivier Baroux et dans La Jeune Fille et les Loups de Gilles Legrand.
Il passe à la réalisation en 2007 avec Sans arme, ni haine, ni violence, un film biographique consacré à Albert Spaggiari{{,}}.