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Emily Mortimer est née à Finsbury Park, à Londres. Elle est la fille de l'avocat et écrivain John Mortimer, auteur de la série de romans policiers Rumpole, et de sa seconde épouse, Penelope (née Gollop). Elle a une sœur cadette, Rosie, et un demi-frère et une demi-sœur plus âgés, Sally Silverman et Jeremy, issus du premier mariage de son père à l'auteur Penelope Fletcher. Elle a également un autre demi-frère, Ross Bentley, né de la liaison de son père avec l'actrice Wendy Craig.
Elle a étudié à la St Paul's Girls' School, dans l'ouest de Londres, faisant sa scolarité dans cette école en même temps que Rachel Weisz, où elle est apparue dans plusieurs productions scolaires. Emily Mortimer étudie la langue russe au Lincoln College, un des collèges de l'université d'Oxford. Elle reçoit son diplôme en 1994, avant d’étudier l'art dramatique au Moscow Arts Theatre School.
Emily Mortimer lors de la première de {{lien}}, le {{date}} à Toronto. Avant de devenir actrice, Mortimer a écrit une chronique pour le Daily Telegraph et a été également scénariste pour l'adaptation des mémoires de {{lien}}, Bad Blood{{,}}.
Elle joua dans plusieurs pièces de théâtre tout en étudiant à l'université d'Oxford, et en participant à une production étudiante, elle est repérée par un producteur qui l'engagera plus tard pour un rôle dans l'adaptation télévisée de The Glass Virgin, de {{Lien}}, en 1995{{,}}. Par la suite, elle participe à d'autres productions télévisées, tels que Sharpe's Sword et La Dynastie des Carey-Lewis. Elle apparaît également dans plusieurs productions théâtrales bien accueillies, comme The Lights au Royal Court Theatre et Le Marchand de Venise au Lyceum Theatre d'Édimbourg. Elle s’est également distinguée au sein de l’équipe de comédiens de Bright Young Things.
En 1996, elle fait ses débuts au cinéma en incarnant l'épouse de Val Kilmer dans le film d'aventure L'Ombre et la proie, réalisé par Stephen Hopkins. Par la suite, elle participe à plusieurs films comme Le Saint, où elle côtoie de nouveau Val Kilmer, Elizabeth, Coup de foudre à Notting Hill et fait même ses débuts aux États-Unis dans le film d'horreur Scream 3 et la comédie familiale Sale Môme, où elle partage la vedette avec Bruce Willis dans ce qui est son plus grand rôle dans un film américain. Elle a tourné sous la direction de Kenneth Branagh dans Peines d'amour perdues, durant lequel elle rencontre celui qui deviendra son époux, Alessandro Nivola.
Ce n'est pourtant qu'en 2001 qu'elle décroche un premier grand rôle dans la comédie Lovely & Amazing, saluée par la critique et qui a obtenu un succès au Festival de Toronto, où sa prestation lui vaut d'obtenir l'Independent Spirit Award de la meilleure actrice dans un second rôle. Partageant sa vie entre les États-Unis et le Royaume-Uni, elle enchaîne les films, notamment en incarnant une criminelle dans Le 51e État, en étant la partenaire d'Ewan McGregor dans Young Adam et en devenant la mère d'un enfant d'un enfant muet dans Dear Frankie.
La consécration venant du public viendra en 2005 avec Match Point, de Woody Allen, où elle incarne la petite amie trompée de Jonathan Rhys-Meyers. Le film obtient un énorme succès en salles et les éloges de la critique.
Elle alterne grosses productions, comme La Panthère Rose et La Panthère rose 2 et films d'auteur ou film à distribution limité comme Paris, je t'aime, Transsibérien et Une fiancée pas comme les autres, où elle devient la belle-sœur de Ryan Gosling, qui lui vaut d'être nommée au Satellite Award de la meilleure actrice dans un rôle secondaire, tout en continuant à tourner pour la télévision, notamment trois épisodes de la série humoristique 30 Rock.
Récemment, elle a participé à deux thrillers, étant tour à tour un inspecteur de police dans Harry Brown et une patiente d'un hôpital psychiatrique dans Shutter Island, de Martin Scorsese. En 2012, elle incarne le rôle de Mackenzie MacHale, productrice d'une émission TV, dans la série d'Aaron Sorkin The Newsroom. En 2013, elle créée et joue dans la série comique Doll & Em, avec son amie de longue date, l'actrice et humoriste Dolly Wells{{,}}.
Elle est mariée depuis 2003 à l'acteur américain Alessandro Nivola, rencontré sur le tournage de Peines d'amour perdues, avec lequel elle a eu deux enfants (Samuel John, né en septembre 2003 et May Rose, née en janvier 2010).
Depuis 2010, elle est naturalisée américaine afin d'éviter de payer des droits de succession dans le cas où quelque chose arriverait à son mari. Emily Mortimer s'est déclarée athée.