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Charles Berling est le quatrième d'une fratrie de six enfants (cinq frères et sœurs). Fils d'un médecin de marine anesthésiste issu d’une famille de polytechniciens, il est aussi le neveu de l'universitaire et critique littéraire Raymond Picard. Sa mère, Nadia, née à Meknès (Maroc) et décédée en 2004, professeur d’anglais puis femme au foyer, est la « fille unique de colons du Maroc »{{,}}. Ses parents l'ont baptisé Charles car il est né en 1958 et que « de Gaulle les impressionnait beaucoup ».
À deux ans, suivant les affectations de son père, il quitte Paris pour Brest, puis Toulon, avant de partir, à sept ans, pour Tahiti et Moorea. Il revient à Toulon sept ans plus tard.
Il découvre le théâtre à quinze ans en jouant au sein de l'atelier théâtre, créé par son frère aîné, au lycée Dumont-d'Urville de Toulon.
Après son baccalauréat, il suit une formation de comédien à l'INSAS à Bruxelles puis intègre la Compagnie des Mirabelles et le théâtre national de Strasbourg dirigé par Jean-Louis Martinelli.
Après une dizaine d'années de carrière exclusivement théâtrale exigeante et riche, il se fait connaître au grand public par les films Nelly et Monsieur Arnaud de Claude Sautet et surtout, en 1996, Ridicule de Patrice Leconte pour lequel il est nommé pour le César du meilleur acteur.
Il a joué des rôles divers, du blanchisseur de province un peu complexé de Nettoyage à sec au cadre aux dents longues dans Demonlover. Il alterne films populaires (Père et Fils, 15 août...) et des films d'auteur (L'Ennui, L'Heure d'été...).
En 2002, il interprète Jean Moulin dans un téléfilm pour France 2. Début 2009, il se met dans la peau de Robert Badinter, dans l'adaptation télévisée des ouvrages L'Abolition et L'Exécution, écrits par ce dernier qui fut Garde des Sceaux de 1981 à 1986. Ce téléfilm sera suivi en moyenne par environ 3,8 millions de téléspectateurs.
Le 22 avril 2010, Charles Berling et son frère Philippe Berling, metteur en scène, sont nommés à la direction du théâtre Liberté à Toulon par le maire Hubert Falco. Cette salle, un ancien cinéma Pathé reconverti en théâtre, a ouvert en septembre 2011. Il dispose de trois salles de 703, 200 et 146 places. Le théâtre Liberté est en phase de préfiguration pour l'obtention du label Scène nationale, label qui serait partagé avec le Centre national de création et de diffusion culturelles de Châteauvallon. L'inauguration du Théâtre Liberté a eu lieu le 17 septembre 2011.
Également chanteur, Charles Berling publie un album, Jeune Chanteur, le 6 février 2012. Il a collaboré avec plusieurs artistes comme Carla Bruni-Sarkozy, Bertrand Burgalat ou encore Philippe Jakko pour la composition et écrit les paroles de toutes ses chansons.
Au printemps 2015, il commence le tournage de son premier long métrage, adapté de son livre Aujourd'hui, maman est morte, avec dans la distribution, François Damiens, Ludivine Sagnier, Emmanuelle Riva et lui-même.
Il est le père de l'acteur Émile Berling.
En 2011, il parle publiquement de ses expériences homosexuelles, il ajoute ne se considérer ni gay, ni hétérosexuel, ni bisexuel{{,}}.